Biomiga Express Endofree Plasmid Midiprep - PD2468-00

Description :

Introduction 

Key to the kit is our proprietary DNA binding systems that allow the highly efficient binding of DNA to our ezBindTM matrix while proteins and other impurities are removed by Wash Buffer. Nucleic acids are easily eluted with sterile water or Elution Buffer.

Unlike other kits in the markets, no chaotropic salts are contained in the buffer of our patented plasmid purification kit. The purified DNA is guanidine/anion exchange resin residues free.

Plasmid isolated with traditional protocol normally contains high level of endotoxins (Lipopolysaccharides or LPS). For transfection of endotoxin sensitive cell lines or microinjection, the endotoxins should be removed before the applications. The EZgene^TM endofree system uses a specially formulated buffer that extracts the endotoxin from the plasmid DNA. Two rounds of extraction will reduce the endotoxin level to 0.1 EU (Endotoxin) per µg of plasmid DNA. 

This kit is designed for fast and efficient purification of plasmid DNA from 15 to 50 mL of E. coli culture. The midi column has a plasmid DNA binding capacity of 250 µg. 

The purified endofree DNA is ready for high performance of downstream applications such as transfection of endotoxin-sensitive cell lines, primary cultured cells or microinjection. 

Important Notes 

Plasmid Copy Numbers: The yield of plasmid DNA depends on the origin of the replication and the size of the plasmid. The protocols are optimized for high copy number plasmid purification. For low copy number plasmids, both the culture volume and the buffer volume need to be scaled up 2 times. Please contact our customer service for further information and reference Table 1 for the commonly used plasmids, 

Table 1 Commonly used plasmid and expected yield.

Host Strains: The strains used for propagating plasmid have significant influence on yield. Host strains such as Top 10 and DH5a yield high-quality plasmid DNA. endA+ strains such as JM101, JM110, HB101, TG1 and their derivatives, normally have low plasmid yield due to either endogenous endonucleases or high carbohydrates released during lysis. We recommend transform plasmid to an endA- strain if the yield is not satisfactory. For purifying plasmid DNA from endA+ strains (Table 2), we recommend use product PD1712.   

Table2 endA strains of E. Coli.

Optimal Cell Mass (OD600 x mL of Culture): This procedure is designed for isolating plasmid grown in standard LB medium (Luria Bertani) for 12 -16 hours to a density of OD600 2.0 to 3.0. If rich mediums such as TB or 2xYT are used, make sure the cell density doesn't exceed 3.0 (OD600). A high ratio of biomass over lysis buffers result in low DNA yield and purity. The midi I column has an optimal biomass of 100-200. For example, if the OD600 is 3.0, the optimal culture volume should be 15 to 50 mL. 

Culture Volume: Use a flask or tube 4 times bigger in volume than the culture medium to secure optimal condition for bacteria growth. Don't exceed the maximum culture volume suggested in the protocol. Incomplete lysis due to over amount of bacterial culture results in lower yield and less purity.

Storage and Stability

Buffer A1 should be stored at 4°C once RNase A is added. All other materials can be stored at room temperature (22-25°C). The Guaranteed shelf life is 12 months from the date of purchase.

Before Starting

Prepare all components and get all necessary materials ready by examining this instruction booklet and become familiar with each step. 

Important

• RNaseA:Itisstableformorethanhalfayearwhenstoredatroomtemperature.SpindowntheRNaseAvialbriefly.AddtheRNaseAsolutiontoBufferA1andmixwellbeforeuse.Storeat4°C.
• BufferB1precipitatesbelowroomtemperature.Itiscriticaltowarmupthebufferat50°Ctodissolvetheprecipitatesbeforeuse.
• BufferN3mayformprecipitatesbelow10°C,warmupat37°Ctodissolvetheprecipitatesbeforeuse.
• KeepthecaptightlyclosedforBufferB1afteruse.
• Makesuretheavailabilityofcentrifuge(13,000rpm).Especially,aftermixingthelysatewithethanol,thesampleneedstobeprocessedimmediatelybycentrifugation.
• Carryoutallcentrifugationsatroomtemperature.

Materials supplied by users

• 100%ethanol
• Highspeedcentrifuge
• 50mLhighspeedcentrifugetubes
• 50mLconicaltubes
• IsopropanolifprecipitatetheplasmidDNA.

Kit Contents

*Add 20 mL (PD2468-00) or 96 mL (PD2468-01) or 216 mL (PD2468-02) 96-100% ethanol to each DNA Wash Buffer bottle before use.